试验结果

SNAP25切割图

已纯化重组体GST-SNAP25-EGFP,是为了恢复“甲硫胺酰基r-梭菌属肉毒杆菌多肽-1六肽-40”蛋白的活性化。由于野生型BoNT/A Lc切割了SNAP25的C末端部分,因此,GST&EGFP在各个N-末端和C-末端以25kDa大小进行了重组和纯化,以便确实地确认切割形式。通过“甲硫胺酰基r-梭菌属肉毒杆菌多肽-1六肽-40”将75kDa的GST-SNAP25-EGFP切割为50kDa和25kDa的蛋白质。

SNAP25切割

GST-SNAP25-EGFP切割后大小的改变

GST

GST

SNAP25

SNAP25

EGFP

EGFP

자산 6.png

75kDa

50kDa + 25kDa

体外SNAP25切割试验

자산 1.png

GST-SNAP25-EGFP

GST-SNAP25

EGFP

缓冲条件:1mM二硫苏糖醇、1mM羟乙基哌嗪乙硫磺酸、1mM氯化钠、2uM氯化锌
反应:37℃,3hrs
聚丙烯酰胺凝胶电泳负载条件
- 12%的聚丙烯酰胺凝胶电泳
-电压:120V

体外SNAP25切割试验

在体外以各剂量的“甲硫胺酰基r-梭菌属肉毒杆菌多肽-1六肽-40”与GST-SNAP25-EGFR蛋白进行反应,观察GST-SNAP25-EGFP是否会被“甲硫胺酰基r-梭菌属肉毒杆菌多肽-1六肽-40”切割。结果显示,GST-SNAP25-EGFP蛋白是否会被切割为GST-SNAP25(50kDa)、EGFP(25kDa),主要取决于“甲硫胺酰基r-梭菌属肉毒杆菌多肽-1六肽-40”的剂量。

细胞渗透试验

Vehicle

Lc

BPMed_BoLCA

1 hr

3 hr

6 hr

4.png

“甲硫胺酰基r-梭菌属肉毒杆菌多肽-1六肽-40”渗透角质细胞

角质细胞渗透

以FITC共轭的“甲硫胺酰基r-梭菌属肉毒杆菌多肽-1六肽-40”蛋白对角质细胞进行细胞治疗。1至6小时后,可在细胞内观察到蛋白质。该结果表明“甲硫胺酰基r-梭菌属肉毒杆菌多肽-1六肽-40”可渗透入皮肤。

* 治疗条件
- HaCaT细胞
- 肽:5μm

Vehicle

Lc

BPMed_BoLCA

1.png
2.png
3.png

“甲硫胺酰基r-梭菌属肉毒杆菌多肽-1六肽-40”细胞渗透试验

人神经元细胞的潜力

以FITC共轭的“甲硫胺酰基r-梭菌属肉毒杆菌多肽-1六肽-40”蛋白对不同的SiMa细胞(人神经母细胞瘤)进行细胞治疗。3小时后,可在细胞内观察到蛋白质。该结果表明“甲硫胺酰基r-梭菌属肉毒杆菌多肽-1六肽-40”可递送至肉毒杆菌蛋白质最重要的靶标细胞——人神经元细胞。

* 治疗条件
- FITC共轭:5μg
- 时间:3hrs
- 方法:共轭

자산 1.png

“甲硫胺酰基r-梭菌属肉毒杆菌多肽-1六肽-40”透皮扩散试验

透皮扩散

透皮扩散试验使用了Strat-M膜(密理博公司产品)。通过ELISA,将从30分钟至24小时的“甲硫胺酰基r-梭菌属肉毒杆菌多肽-1六肽-40”渗透量转化为累积频率。即使在24小时后,渗透仍在持续。